成果信息
效表達與純化可溶性重組人ＰＣＴ蛋白，制備高靈敏度和高特異性的抗人ＰＣＴ醫(yī)用診斷單克隆 抗體。方法：大腸桿菌表達重組人ＰＣＴ蛋白后，利用飽和硫酸銨沉淀和親和層析方法純化 ＰＣＴ蛋白后，經(jīng)質(zhì)譜、 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎｂｌ ｏ ｔ和間接 ＥＬＩ ＳＡ法進行性質(zhì)鑒定和分析重組蛋白的表達與免疫反應性；重組蛋白免疫小鼠，經(jīng)細胞融 合及篩選制備抗ＰＣＴ單克隆抗體（ｍＡｂ），獲得７株抗ＰＣＴ單克隆抗體細胞株，經(jīng)ＥＬＩＳＡ鑒定，篩選抗體可與 ＰＣＴ抗 原有良好的特異性反應。結論：利用重組人ＰＣＴ蛋白免疫制備了抗人ＰＣＴ單克隆抗體，為進一步研發(fā) ＰＣＴ快速 診斷試劑提供了原料。 應用前景：利用重組人ＰＣＴ蛋白免疫制備了抗人ＰＣＴ單克隆抗體，經(jīng)過廈門大學傳染病診斷試劑與疫苗工程技術研究中心和北京熱景生物技術有限公司評估，該抗體的特異性和親和力達到國際優(yōu)質(zhì)抗體的同類水平，可以作為 ＰＣＴ快速診斷試的原料以及進行產(chǎn)業(yè)化。)
背景介紹
細菌感染導致的抗生素濫用致細菌耐藥是我國乃至全球范圍最突出的公共衛(wèi)生問題之一，并且由其導致的膿毒血癥也嚴重危害著人類健康，成為非心臟ICU死亡的主要原因。普通的細菌感染本身并不可怕，只要早期診斷明確并針對性治療，不會造成嚴重后果。所以，細菌感染的早期診斷和鑒別診斷極為重要。臨床常用傳統(tǒng)感染診斷指標主要有外周白細胞計數(shù)(WBC)、血液中C反應蛋白(CRP)和血液細菌培養(yǎng)等，但都存在費時、誤差大、靈敏度低、特異性差等缺點，因此，應用新的標志物來診斷細菌感染性疾病非常必要。降鈣素原(PCT)是一種有116個氨基酸殘基組成、分子量為13kDa的糖蛋白，血清降鈣素的前體物。生理情況下，血中PCT濃度極低，基本檢測不到，但在一些細菌感染性疾病，包括細菌感染引發(fā)的全身炎癥反應、敗血癥或膿毒性休克等患者中血清PCT水平顯著升高，并且和疾病嚴重程度呈正相關。因此，PCT可作為一種高靈敏的新的炎癥檢測指標。)
應用前景
目前PCT的主要測定方法包括定性(半定量)測定和定量測定兩種方式。主流的診斷產(chǎn)品均為國外進口，價格昂貴。因此，研發(fā)具有自主知識產(chǎn)權、有較高靈敏度和特異性的PCT檢測技術和相應產(chǎn)品，具有重要的社會和經(jīng)濟價值。)
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