成果信息
本發(fā)明根據(jù)siRNA的設(shè)計(jì)原則,分別選擇HBV包膜蛋白(MS)編碼區(qū)69nt-87nt,聚合酶(P)編碼區(qū)708nt-726nt,核心蛋白(C)編碼區(qū)2052nt-2070nt的核苷酸序列,設(shè)計(jì)相應(yīng)的siRNA序列,用BLAST軟件進(jìn)行同源分析證實(shí)為HBV高度保守序列后,化學(xué)合成單鏈寡核苷酸,體外經(jīng)退火形成雙鏈DNA,與真核表達(dá)載體pTZU6+1連接,酶切鑒定和序列測(cè)定分析表明成功構(gòu)建了三種靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表達(dá)載體。上述表達(dá)載體通過陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)與HBV真核表達(dá)載體pHBV共轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞HepG2后,采用免疫熒光和Abbott實(shí)驗(yàn)均證實(shí)HBV siRNA具有較強(qiáng)抑制病毒復(fù)制和表達(dá)的作用。)
背景介紹
目前,乙型肝炎(HBV)抗病毒治療方案還處于不斷探索和實(shí)踐的過程,已有的核苷類似物和干擾素均不能從根本上解決抗病毒問題,因此迫切需要從全新的角度思考抗病毒治療的措施;近年來基因阻斷技術(shù)在基因功能研究中有很大進(jìn)展,臨床治療研究也顯示了良好的前景,為我們?cè)O(shè)計(jì)HBV抗病毒治療方案提供了可借鑒的技術(shù)手段。)
應(yīng)用前景
該技術(shù)目前主要應(yīng)用于基因功能和抗腫瘤研究,而抗病毒治療研究才剛剛起步,但已顯示了良好的前景和巨大潛力。)