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成果信息
本設(shè)計(jì)與傳統(tǒng)方法相比，利用酶免疫分析法檢測(cè)干酪素等乳制品中堿性磷酸酶的活性具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)限低和靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)該方法直接排除了陰性和陽(yáng)性控制過(guò)程，使操作步驟簡(jiǎn)化，如果能將該方法商品化，將大大提高檢測(cè)效率。主要指標(biāo)：1.純奶經(jīng)正丁醇處理得粗酶液；粗酶液依次經(jīng)鹽析、Sephadex G-25層析柱、DEAE-Cellulose 52離子交換層析柱和Sephadex G-200層析柱純化制得樣品。以對(duì)硝基酚磷酸酯(p-NPP)為底物測(cè)定該酶的性質(zhì)，其最適溫度為41.5℃，最適pH值為10.0，以雙倒數(shù)法作圖，測(cè)得該酶米氏反應(yīng)常數(shù)Km=7.39mmol/L。2.堿性磷酸酯酶單克隆抗體酶免疫分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢出范圍為１ng\mL-300ng\mL。)
背景介紹
磷酸酯酶(phosphatase)是細(xì)菌代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種中間產(chǎn)物，在細(xì)菌大量生長(zhǎng)繁殖的情況下, 磷酸酯酶的活性也隨之增加，呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。根據(jù)反向推理的原理，如果對(duì)某一產(chǎn)品經(jīng)檢測(cè)磷酸酯酶為陽(yáng)性，即說(shuō)明該產(chǎn)品中含有的細(xì)菌數(shù)量較多，具有一定的危害性。目前，一些發(fā)達(dá)國(guó)家在食品工業(yè)中，采用對(duì)最終產(chǎn)品進(jìn)行磷酸酯酶的檢測(cè)，來(lái)判定這些產(chǎn)品的內(nèi)在衛(wèi)生質(zhì)量。此外，磷酸酯酶也是乳汁中普遍存在的一種酶，是乳細(xì)胞代謝的產(chǎn)物，締合在乳脂球膜上。該酶熱穩(wěn)定性高，在巴氏殺菌條件下，62.8℃，30min或71.7℃，5s，可完全滅活，屆時(shí)乳中其他無(wú)芽孢致病微生物也全部殺死。因此，磷酸酯酶活性的測(cè)定也被用于乳制品中巴氏殺菌效果是否完全的判定方法。目前，國(guó)內(nèi)外有關(guān)在干酪素中磷酸酯酶檢測(cè)方法的報(bào)道甚少。個(gè)別方法程序復(fù)雜繁瑣，檢驗(yàn)過(guò)程較長(zhǎng)，且檢驗(yàn)成本較高，不能滿足我國(guó)出口檢驗(yàn)檢疫工作的需要。)
應(yīng)用前景
本設(shè)計(jì)操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)限低和靈敏度高，同時(shí)本方法直接排除了陰性和陽(yáng)性控制過(guò)程，使操作步驟簡(jiǎn)化，如果能將該方法商品化，將大大提高檢測(cè)效率，可見(jiàn)具有巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。)
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