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科學(xué)家建立用于抗原表位精細(xì)作圖的肽生物合成法

發(fā)布時(shí)間： 2017年10月09日

上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所徐萬祥研究員和復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)院謝毅課題組合作，在抗原表位作圖和抗體識(shí)別精細(xì)表位鑒定的免疫學(xué)領(lǐng)域建立了肽生物合成法。附帶詳細(xì)操作程序的方法學(xué)相關(guān)研究成果，日前發(fā)表于《公共科學(xué)圖書館-綜合》期刊。

新改良法仍使用截短的谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（GST188）作為短肽的基因工程表達(dá)蛋白載體，但通過在pXXGST-1質(zhì)粒的克隆區(qū)插入一病毒基因，既保留了原方法的主要特點(diǎn)，如相對(duì)肽化學(xué)合成的編碼DNA片段合成費(fèi)用低廉、短肽重組克隆構(gòu)建簡便、和表達(dá)的短肽無需純化就能用于化學(xué)發(fā)光試劑顯色的免疫印跡鑒定，也形成了二個(gè)新優(yōu)點(diǎn)：可回收雙酶切pXXGST-3質(zhì)粒載體，通過排除不完全酶切的載體而確保目的重組克隆構(gòu)建成功率；由于不再需要設(shè)置對(duì)照蛋白，通過蛋白凝膠電泳篩選重組克隆更方便可靠。

據(jù)悉，研究成果表明此法可實(shí)現(xiàn)用目前其他任一技術(shù)都無法企及的目標(biāo)，即能鑒定出是每一非構(gòu)象型抗體典型標(biāo)簽的表位最小基序（最短3 肽最長8肽），并顯示出這一鑒定的意義和必要性。例如：它有助于解碼任一靶蛋白抗原IgG-表位組；有助于避免時(shí)下常見兩個(gè)不同術(shù)語的混用，如將未經(jīng)過精細(xì)表位鑒定的‘抗原性肽’，甚至將37肽稱之為‘表位’或‘表位肽’；也有助于國家相關(guān)部門率先制定將抗體識(shí)別的精細(xì)肽基序特征作為非構(gòu)象型抗體藥物的審批新標(biāo)準(zhǔn)，因?yàn)閳?zhí)行這一指標(biāo)已有切實(shí)可行的方法；尤其對(duì)交叉反應(yīng)性單克隆抗體而言，還可能因此擴(kuò)大其在同源蛋白中應(yīng)用范圍。

眾所周知，重大疾病肽診斷抗原試劑和預(yù)防性合成肽疫苗的研制都依賴于靶蛋白上線性表位的發(fā)現(xiàn)。因此，這一從2004年起意、創(chuàng)建、改良到目前最終優(yōu)化的GST188-生物合成肽法，為解碼感興趣靶蛋白的表位組并發(fā)現(xiàn)用于研制預(yù)防性重組多表位肽疫苗的更多功能性抗體中和表位，提供了操作簡便經(jīng)濟(jì)且可靠的新工具。